冲洗： 材料自固定液中取出后，需立即冲洗，使其中所有的固定液全部除去，以妨碍染色 有些固定液，如10%福尔马林液、Bouin氏液固定的材料，若时间较短的话可不必冲洗。但时间过长亦需冲洗 3、脱水（37度恒温箱） 所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入，这一过程称为脱水。 脱水是否彻底，直接关系到组织是否能充分透明 脱水过度（原因是组织在纯酒精内时间过久，发生组织质地发生变化）容易造成组织发脆。造成组织发脆的原因还有加温（温度超过36℃）、脱水剂内加有丙酮、浸蜡用的石蜡
中二甲苯过多等等。一般我们总认为组织发脆跟高浓度酒精有关，而忽视了与低浓度的酒精关系，其实低浓度的酒精具有强大的穿透力，比纯酒精更容易渗透到组织块内部使之脱水，组织如果在低浓度酒精里充分脱水，在高浓度酒精里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水份，因此，仅需短时间就可完成，如果这时不缩短纯酒精的时间，便会引起组织发脆；如果脱水时加温，使用丙酮，还可引起组织收缩，并影响免疫组织化学的标记.
①新鲜恒冷箱冷冻切片，厚6~8μm，平贴在盖玻片上。
②滴染法：将有冷冻切片的盖玻片（标本面朝上）平放于预热好的培养皿中（底部垫一湿滤纸），滴加孵育液至全部覆盖组织，于37℃温箱中孵育45~60分钟（肝，心肌组织15分钟即可）。
③于生理盐水中冲洗二次（轻晃，以防脱片）。
④10%福尔马林生理盐水固定10分钟。
⑤15%酒精浸洗5分钟（换二次）。
⑥甘油明胶封片。
结果：酶活性强处呈蓝色颗粒（双甲沉淀），酶活性较低时形成紫红色单甲。在光镜下，该酶活性于肝小叶内分布呈明显分带现象，周边带强于中央带。在心肌细胞纵切面，酶活性颗粒沿心肌细胞长轴整齐排列，相邻心肌细胞的空白处为闰盘。
浸蜡：熔化后的液体石蜡作为组织块的支撑物浸入组织块，替换出组织内的透明剂的过程为浸蜡。其目的是以石蜡置换出组织块中的二甲苯，石蜡渗入组织内部，使原来较软的组织块变成具有一定硬度的含蜡的组织块，易于下一步的石蜡bao埋和切片。组织块浸蜡一般要经过要经过2-3次石蜡浸渍才能完成。一般{dy}缸石蜡用低熔点的软蜡（熔点54℃以下），第二缸、第三缸石蜡用高熔点的硬蜡（熔点60-62℃），组织块依次浸渍，浸蜡的总时间一般在3h左右。若浸蜡时间过长，会造成组织脆硬，切片时易破碎，如豆渣样。若浸蜡时间不足，则浸蜡不透，也难以制成高质量的切片。
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