性js测试

1 范围
本规范规定了测定化妆品中雌三醇等7 种性js的{gx}液相色谱-二极管阵列检测器
法、{gx}液相色谱-紫外检测器/荧光检测器法和气相色谱/质谱鉴定法。
本规范适用于化妆品中雌三醇等7 种性js的检测和鉴定。
{dy}法 {gx}液相色谱-二极管阵列检测器法
2 方法提要
以有机溶剂提取化妆品中的性js，用{gx}液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外
吸收光谱图或荧光光谱图定性，以峰面积进行定量。各js的检出限及取1g 样品时的检出
浓度见表1。
表1 各js的检出限和检出浓度
js组分 雌三醇 雌酮 己烯雌酚雌二醇睾丸酮甲基睾丸酮 黄体酮
检出限，μg 0.02 0.04 0.01 0.02 0.002 0.002 0.003
检出浓度，μg/g 40 80 20 40 4 4 6
3 试剂
本标准所用试剂除另有说明外，均为优级纯试剂。
3.1 甲醇。
3.2 饱和氯化钠溶液。
3.3 环己烷。
3.4 硫酸 [ϕ（H2SO4）＝2％]：取硫酸（ρ20＝1.84g/mL）2mL，缓慢加入到98mL 水中，
混匀。
3.5 js标准溶液
3.5.1 雌js标准溶液[ρ（雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚）＝2g/L]：分别称取雌酮、
雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.200g，用少量甲醇（3.1）溶解，移至100mL 容量瓶中，用
甲醇稀释到刻度。
3.5.2 雄js标准溶液[ρ（睾丸酮、甲基睾丸酮）＝600mg/L]：分别称取睾丸酮、甲基睾丸
酮各0.600g，用少量甲醇（3.1）溶解，转移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。1mL
此溶液含以上两种雄js6.00mg。移取此标准溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇
（3.1）稀释到刻度。
3.5.3 孕js标准溶液[ρ（黄体酮）＝600mg/L]：称取黄体酮0.600g，用少量甲醇（3.1）
溶解，转移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。1mL 此溶液含孕js6.00mg。移取此
标准溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀释到刻度。
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3.5.4 混合标准使用溶液：分别移取雌js标准溶液（3.5.1）50.0mL，雄js标准溶液（3.5.2）
5.00mL 和孕js标准溶液（3.5.3）5.00mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀释到刻
度。1mL 此溶液分别含4 种雌js各1.00mg、2 种雄js各30.0μg 和1 种孕js30.0μg。
4 仪器
4.1 {gx}液相色谱仪，具等容泵、二极管阵列检测器或荧光检测器。
4.2 离心机。
4.3 具塞比色管，10mL。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
5.1.1 溶液状样品：准确称取样品1g～2g 于10mL 具塞比色管中，在水浴上馏除乙醇等挥
发性有机溶剂，用甲醇（3.1）稀释到10mL，备用。
5.1.2 膏状、乳状样品：准确称取样品1g～2g 于100mL 锥形瓶中，加入饱和氯化钠溶液（3.2）
50mL，硫酸（3.4）2mL，振荡溶解后转移至100mL 分液漏斗。以环己烷（3.3）30mL 分三
次萃取，必要时离心分离。合并环己烷并在水浴上馏除。用甲醇（3.1）溶解残留物，转移
到10mL 具塞比色管中，用甲醇稀释到刻度。混匀后，经0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。
5.2 色谱参考条件
色谱柱：C18 柱，250×4.6mm，10μm；
检测波长：二极管阵列检测器（cxjs－204nm，xxjs－245nm）或荧光检测器
（激发波长280nm，发射波长310nm）；
流动相：甲醇+水=60+40；
流速：1.3mL/min；
5.3 校准曲线的制备
移取js标准使用溶液（3.5.4）0.00、1.00、2.00、5.00mL 置于10mL 具塞比色管中，
用甲醇（3.1）稀释到刻度。调节仪器到{zj0}状态，取样5μL 注入{gx}液相色谱仪，以标准
品的峰面积绘制校准曲线。
5.4 测定
取待测溶液5μL 注入{gx}液相色谱仪，根据峰的保留时间和紫外吸收光谱图或荧光光
谱图定性，根据峰面积从曲线上查出待测溶液中js的质量浓度。
6 计算
ρ×V
ω（js）=
m
式中：ω（js）——样品中js的质量分数，μg/g；
ρ——从曲线上查出测试溶液中js的质量浓度，mg/L；
V——样品定容体积，mL；
m——样品取样量，g。
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7 色谱图
第二法 {gx}液相色谱-紫外检测器法/荧光检测器法
8 方法提要
以有机溶剂提取化妆品中的性js，用{gx}液相色谱仪进行分析，以保留时间定性，
峰面积定量。各js的检出限及取1g 样品时的检出浓度见表2。
表2 各js的检出限和检出浓度
js组分 雌三醇 雌酮 己烯雌酚雌二醇睾丸酮甲基睾丸酮 黄体酮
检出限，μg 0.05 0.4 0.03 0.035 0.002 0.002 0.004
检出浓度，μg/g 100 800 60 70 4 4 8
9 试剂
同{dy}法。
图2 xxjs的色谱图
图1 cxjs的色谱图
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10 仪器
10.1 {gx}液相色谱仪：具等容泵、紫外检测器或荧光检测器。
10.2 离心机。
10.3 具塞比色管，10mL。
11 分析步骤
11.1 样品预处理
同{dy}法。
11.2 色谱参考条件
色谱柱：C18 柱，250mm×4.6mm，10μm；
检测波长：紫外检测器（检测波长254nm）或荧光检测器（激发波长280nm，发射波
长310nm）；
流动相：甲醇+水=80+20；
柱温：45℃；
流速：0.6mL/min。
11.3 校准曲线的制备
移取0、1.0、2.0、5.0mL js标准使用液（3.5.4）置于10mL 具塞试管中，用甲醇（3.1）
稀释到刻度。调节仪器到{zj0}状态，取样5μL 注入{gx}液相色谱仪，以标准品的峰面积绘
制校准曲线。
11.4 测定
取待测溶液5μL 注入{gx}液相色谱仪，根据峰的保留时间定性，根据峰面积从曲线上
查出待测溶液中js的质量浓度。
12 计算
同{dy}法。
13 色谱图
图 3 性js的色谱图
1：雌三醇(2.68min)； 2：雌酮(3.62min)； 3：己烯雌酚(4.22min)； 4：雌二醇(4.81min)；
5：睾丸酮(5.58min)； 6：甲基睾丸酮(6.54min)； 7：黄体酮(9.74min