人肾皮质近曲小管上皮细胞 Human renal cortical proximal tubule epithelial cells 详细说明
步骤如下:
1)弃去培养液,用PBS洗1-2次。
2)向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培养液,轻轻吹打细胞。
3)加入等量的的培养液,轻轻吹打混匀后吸出一半,分到新的培养
4)传代比例:1:2-1:3
(6)常见问题及解决方案
1)培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2)细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。
传代方法:收到细胞后,在倒置显微镜下观察细胞生长状态:如果没长满,将培养瓶用75%酒精xd后在超净台内更换新鲜培养液,继续培养,如果细胞已经长满(约80%-90%)则传代后继续培养。
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技术相关问答:
1. 如何选用特殊细胞系培养基?
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,{sx}MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。
2. 何时须更换培养基?
视细胞生长密度而定, 或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。
3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基?
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基, 细胞大都无法立即适应, 造成细胞无法存活。
4.可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
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基本共性:
1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质及糖被构成的生物膜,即细胞膜。
2、所有的细胞都含有两种核酸:即DNA与RNA。
3、作为遗传信息复制与转录的载体。
4、作为蛋白质合成的机器—核糖体,毫无例外地存在于一切细胞内,核糖体,是蛋白质合成的机器,在细胞遗传信息流的传递中起重要作用。
5、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。
6、能进行自我增殖和遗传
7、新陈代谢
8、细胞都具有运动性,包括细胞自身的运动和细胞内部的物质运动
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